Морфологические изменения при введении геля

Коррекцию рельефа кожи и морщин осуществляют путем управляемого введения различных гелей, длительно сохраняю- щихся в тканях. В качестве филлеров используются полимерные соединения синте- тического и природного происхождения. Попадая в ткани кожи, гель может выступать для организма чужеродным агентом, на который возможно развитие воспалительной реакции, в том числе с формированием гранулем. Поэтому одним из основных свойств гелей, помимо их устойчивости к биодеградации, должна являться их максимально воз- можная биологическая индифферентность. В последнее время приобретают популяр- ность гели на основе биополимерных соединений, в частности, гиалуроновой кислоты. В тканях проявляет активность фермент гиалуронидаза, способный деградировать гиа- луроновую кислоту, в том числе и экзогенную. Однако гиалуроновая кислота является основой межуточного вещества соединительной ткани, то есть соединением не чуже- родным, поэтому предполагается, что ее препараты не должны вызывать серьезных реакций отторжения. Оценить скорость деградации геля в тканях и возможности развития на него воспа- лительных реакций можно с помощью инвазивных гистологических и гистохимических методов исследования, выполнение которых на пациентах представляется делом весьма затруднительным. Поэтому с целью оценки тканевой деградации и безопасности приме- нения геля на основе гиалуроновой кислоты мы предприняли серию экспериментов на животных. В качестве модельного геля использовали гель Repleri 3 (ООО «НовоНексус», Москва), представляющий собой стабилизированную гиалуроновую кислоту неживотного происхождения в концентрации 24 мг/мл, размер коллоидных частиц 0,28-0,5 мкм. В эксперименте были использованы самки белых беспородных мышей весом 20-22 г. (питомник «Рапполово» Россия). Животные были распределены на три группы: 1) вве-дение геля (30 мышей), 2) контроль — введение физиологического раствора (20 мышей), 3) интактный контроль (24 мыши). Мышам коротко обстригали шерсть на спине. Инъекци- онную иглу вводили под кожу на всю длину, затем по мере ее извлечения подкожно вво- дили гель; делали две параллельные полосы длиной около 1-1,5см. Аналогично вводили физиологический раствор. Взятие биоптатов кожи проводили через 1, 2, 3 недели, 1, 3 и 6 месяцев (по 4-5 особей в каждой группе на один день). Забор аутопсий проводили в области локализации геля, у животных получивших гелевую инъекцию, и в аналогичной области у контрольных животных. Препараты фик- сировали в 4% формалине. Выполняли гистологическую проводку с обезвоживанием в среде Isoprep («Биовитрум», Санкт-Петербург) и заливкой в парапласт («Sigma» США). Из парапластовых блоков на санном микротоме (Reichert, Австрия) изготавливали сре- зы толщиной 6 мкм и монтировали на предметные стекла (Биовитрум, Санкт-Петербург). Плоскость среза проходит перпендикулярно к поверхности кожи. Препараты окрашивали гематоксилином-эозином («Биовитрум», Санкт-Петербург) и по методу Масона с анилино- вым синим (Bio-optica, Италия). Проводили изучение и фотографирование препаратов с использованием светового микроскопа с системой визуализации изображений DMLB и цифровой камеры DC 300 (Leica, Германия). Окраска препаратов гематоксилином-эозином позволяет увидеть наличие морфоло- гических изменений в структуре ткани, наличие инфильтрации иммунокомпетентными клетками, крупных очагов фиброзирования и целого ряда других патологических изме- нений. При данном типе окраски ядра клеток окрашиваются в синий, а цитоплазма и сое- динительная ткань в малиновый цвет. Оценка препаратов окрашенных гематоксилином- эозином показала: 1. На препаратах кожи животных всех групп, окрашенных гематоксилином-эозином, наблюдаются все основные структурные элементы покровного эпителия мыши. 2. У всех животных получавших инъекцию геля, на всех сроках эксперимента, на пре- паратах определяется наличие геля, окрашивающегося в синий цвет. У животных обеих контрольных групп подобные структуры не наблюдаются. 3. На препаратах животных гелевой группы гель локализован в основном под мышеч- ной фасцией, иногда в гиподерме, в ряде случаев локализация смешанная. 4. В области локализации геля наблюдается нарушение естественной структуры тка- ни, с образованием полости, заполненной гелем. За исключением этого воздействия, на светооптическом уровне других морфологических изменений не наблюдается. 5. Отсутствие инфильтрации имунокомпетентными клетками говорит об отсутствии выраженного местного иммунного ответа на гель. Отсутствует значительное разрастание соединительной ткани, образование гранулем и любые другие эффекты, способные раз- виваться в ответ на введение инородных тел. 6. Состояние эпителия и дермы, расположенной вне областей локализации геля у жи- вотных гелевой группы, не отличается от такового у контрольных животных. Анализ гистологических препаратов, окрашенных по методу Масона с анилиновым синим используется для четкого выявления соединительной ткани и позволяет увидеть как очаги фиброзирования, так и другие патологические состояния соединительной ткани, которые могут быть не замечены при двухцветной окраске гематоксилином-эозином. При таком способе окраски ядра клеток окрашиваются в коричневый цвет, цитоплазма — в малиновый, а соединительная ткань — в ярко-синий. Оценка препаратов, окрашенных по методу Масона с анилиновым синим показала: 1. На препаратах кожи животных всех групп, окрашенных по методу Масона, как и при окраске гематоксилином-эозином, наблюдаются все основные структурные элементы по- кровного эпителия мыши. 2. У всех животных, получавших инъекцию геля, на всех сроках эксперимента в пре- паратах определяется наличие полостей, оставшихся после введения геля; сам же гель при таком способе окраски не визуализируется. У животных обеих контрольных групп подобные структуры не выявляются. 3. В областях локализации геля, по границам полостей, на всех сроках эксперимента наблюдается незначительное разрастание соединительной ткани. 4. Состояние дермы, расположенной вне областей локализации геля у животных геле- вой группы, не отличается от такового у контрольных животных. На основании анализа полученных результатов можно заключить, что введение геля на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты приводит к нарушению естествен- ной структуры ткани непосредственно в области введения препарата. Отмечается сохра- нение введенного геля в тканях кожи на протяжении 6 месяцев эксперимента. Интактное состояние эпителия и окружающих тканей, отсутствие воспалительной реакции и значи- тельного разрастания соединительной ткани в области введения геля позволяют с высо- кой вероятностью предположить, что препарат не оказывает существенного эффекта на функции кожного покрова экспериментальных животных. Таким образом показано, что гель на основе стабилизированной гиалуроновой кис- лоты Repleri 3 способен относительно долго сохраняться в тканях кожи, при этом не вызывая значимой реакции отторжения, что делает его эффективным и безопасным в применении филлером. Возможно, что при введении чрезмерных объемов препарата раз- рушение ткани в области его нахождения может стать определенной проблемой, однако данную проблему можно избежать, соблюдая правила введения геля.